Какво да вземете предвид при избора на правилния микроскоп за система за изображения на живи клетки

За да извършите успешно експерименти с изображения на живи клетки, използването на правилния подход е от решаващо значение. Когато избирате подходящ микроскоп за вашето изображение на живи клетки, трябва да имате предвид следните аспекти: жизнеспособност на образеца, скорост на получаване на изображение (времева разделителна способност) и необходима разделителна способност във всичките три измерения.

During live cell imaging, certain environmental conditions must be maintained to avoid detrimental physiological changes. In order to capture physiologically relevant cellular dynamics, live cell experiments require specific environmental conditions, including temperature, pH (via CO2), and humidity control. Furthermore, some experiments may even require hypoxic conditions. Modern incubation systems not only tightly control environmental conditions, they can also provide detailed data reports and alert users to temperature, gas, or humidity variations during the course of an imaging experiment. To minimize or avoid the effects of photodamage, getting the right balance between sensitive detection, accurate label separation (if using >1 етикет) и най-ниската доза светлина за възбуждане е от решаващо значение.

За експерименти с живи клетки, високоскоростното придобиване често е критично, по-специално за изследване на бързи динамични процеси като наблюдение на везикули. Използването на оптични филтри води до ограничения на скоростта поради необходимостта от последователно изобразяване при смяна на комплекти филтри за всеки цвят, използвани за изследване на взаимодействието на множество компоненти. Последователното събиране на изображения изисква повече време от едновременното събиране на изображения и в резултат на това бързите движения на образеца могат да бъдат пропуснати по време на придобиването, тъй като всеки цвят има по-дълъг интервал от време от едно изображение до следващо. Освен това, когато директното сравнение между два или повече цвята е от съществено значение, сигналите може да са се преместили дори между отделните придобивания на флуорофорите, което усложнява тълкуването на данните.

Налични са множество технологии за получаване на изображения в 3 измерения във времето. Изборът на система зависи от вашия експеримент и от това дали по-висока скорост или по-малко осветяване на пробата по време на изобразяване е вашият приоритет при получаване на желаната 3D резолюция. Изборът на най-подходящата система традиционно изисква да направите избор между базирана на камера или конфокална система за изображения на живи клетки, но съвременните решения могат да осигурят и двата модалности по интегриран начин.